Terwijl ze ondergronds werken om een waterleiding te repareren, worden de Brooklyn loodgieters Mario en broer Luigi door een mysterieuze pijp meegevoerd naar een magische nieuwe wereld. Maar wanneer de broers worden gescheiden, begint Mario aan een epische zoektocht naar Luigi. Met de hulp van een in het Paddenstoelenrijk woonachtige en wat training van de wilskrachtige prinses Peach, haalt Mario zijn eigen kracht naar boven.